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              當前位置:首頁  >  技術文章  >  成年小鼠關節軟骨細胞原代培養

              成年小鼠關節軟骨細胞原代培養

              更新時間:2024-03-28      點擊次數:59

              1. C57小鼠,8-10周,通過頸椎脫位處死,浸入75%乙醇浸泡5分鐘,轉移到通風柜中的解剖盤中。

              2. 使用眼科剪和鑷子,使髖關節脫臼,保持股骨頭完整。

              3. 用止血鉗去除每個股骨頭的軟骨帽,將組織放入含2%雙抗的PBS中。

              4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關節軟骨小心移到2ml離心管中。

              5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,加入3ml預熱的Collagenase D1.5mg/ml)。

              6. 放入37℃、80rpm的搖床中進行第一次消化,時間2h 。

              7. 第一次消化結束后,加入含血清的培養基終止消化,40um的細胞篩過濾后,離心1500rpm,2min。

              8. 沉淀用DMEM完丨全培養基重懸,計數,種植在24孔板中。

              9. 在未消化的組織中加入3ml預熱的Collagenase D,放入37℃、80rpm的搖床中進行第二次消化,時間2h,然后收集細胞。


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