成年小鼠關(guān)節軟骨細胞原代培養

1. C57小鼠，8-10周，通過(guò)頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉移到通風(fēng)柜中的解剖盤(pán)中。

2. 使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節脫臼，保持股骨頭完整。

3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中。

4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍，將關(guān)節軟骨小心移到2ml離心管中。

5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預熱的Collagenase D（1.5mg/ml）。

6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化，時(shí)間2h 。

7. 第一次消化結束后，加入含血清的培養基終止消化，40um的細胞篩過(guò)濾后，離心1500rpm，2min。

8. 沉淀用DMEM完丨全培養基重懸，計數，種植在24孔板中。

9. 在未消化的組織中加入3ml預熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化，時(shí)間2h，然后收集細胞。