咨詢(xún)熱線(xiàn)

                          18017847121

                          當前位置:首頁(yè)   >  產(chǎn)品中心  >  實(shí)驗  >  細胞實(shí)驗  >  細胞實(shí)驗.

                          細胞實(shí)驗.

                          簡(jiǎn)要描述:細胞實(shí)驗是上海達為科生物的基礎服務(wù)項目之一,由細胞平臺經(jīng)驗豐富的實(shí)驗人員操作完成。

                          • 更新時(shí)間:2022-12-23
                          • 瀏覽次數:1848

                          詳細介紹

                            細胞實(shí)驗是上海達為科生物的基礎服務(wù)項目之一,由細胞平臺經(jīng)驗豐富的實(shí)驗人員操作完成。
                           
                            一.細胞增殖實(shí)驗
                           
                            1. MTT法:是一種檢測細胞存活和生長(cháng)的方法。該方法已廣泛于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟、快捷。原理:活細胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚( Formazan )并沉積在細胞中,而死細胞無(wú)此功能。二甲基亞砜( DMSO )能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長(cháng)處測定其吸光度值,可間接反 映活細胞數量。在一定細胞數范圍內, MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
                           
                            2. CCK-8法:可用于簡(jiǎn)便而準確的細胞增殖和毒性分析,常用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。原理:該試劑中含有WST-8 [化學(xué)名: 2-(2-甲氧基4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽], 它在電子載體1-甲氧基 -5-甲基吩嗪諭硫酸_二甲酯( 1-Methoxy PMS )的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物( Formazan dye )。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細胞增殖和毒性分析。
                           
                            3. Brdu:即5- Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期, S期活體注射或細胞培養加入。而后利用抗Brdu單克隆抗體ICC染色顯示增殖細胞。同時(shí)結合其它細胞標記物雙重染色可判斷增殖細胞的種類(lèi),增殖速度,對研究細胞動(dòng)力學(xué)有重要意義。但由于抗體分子量大,難于摻入并被有效檢測。因此BrdU檢測需采用DNA酶或HCI或加熱使DNA變性。這些處理方法會(huì )破壞抗原識別位點(diǎn),此外許多細胞周期分析的染料都需要dsDNAD這種處理方法也使得同一樣本無(wú)法同時(shí)進(jìn)行細胞周期分析。
                           
                            4. EDU:即5-Ethynyl-2' - deoxyuridine,是-種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物,能夠在細胞增殖時(shí)期
                           代替胸腺嘧啶(T )滲入正在復制的DNA分子中。通過(guò)基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性,適用于細胞增殖、細胞分化、生長(cháng)與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究,尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、 小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗。
                           
                            二、細胞凋亡
                           
                            ANNEXIN V-PI法:在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸( PS )只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸( PS )由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種分子量為35~ 36kD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過(guò)細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之- -。將Annexin V進(jìn)行熒光素( EGFP、FITC )標記,以標記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶( Propidium Iodide, PI) 是一種核酸染料,它不能透過(guò)完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞, PI能夠透過(guò)細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細胞區分開(kāi)來(lái)。
                           
                            三、細胞遷移和侵襲
                           
                            1. Transwell :是一種侵襲實(shí)驗技術(shù),其實(shí)原理簡(jiǎn)單地說(shuō)就是用一層膜將高營(yíng)養的培養液和低營(yíng)養的培養液隔開(kāi),細胞放在低營(yíng)養的培養液里,為了找吃的,細胞會(huì )往高營(yíng)養的培養液里面跑,但是有膜擋著(zhù),所以要穿過(guò)膜才行。我們在膜上涂上- -層基質(zhì)膠,模仿細胞外基質(zhì),于是細胞要把基質(zhì)消化了才可以從低營(yíng)養的培養液跑到高營(yíng)養的培養液里面,后我們檢測高營(yíng)養的培養液里細胞量就可以知道細胞的侵襲能力了。
                           
                            2.劃痕實(shí)驗:是簡(jiǎn)捷測定細胞遷移運動(dòng)與修復能力的方法,類(lèi)似體外傷口愈合模型,在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長(cháng)的中央區域劃線(xiàn),去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實(shí)驗設定的時(shí)間(例如72h),取出細胞培養板,觀(guān)察周邊細胞是否生長(cháng)(修復)至中央劃痕區,以此判斷細胞是否生長(cháng)(修復)至中央劃痕區,以此判斷細胞的生長(cháng)遷移能力, 實(shí)驗通常需設定正常對照組和實(shí)驗組,實(shí)驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過(guò)不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
                           

                          產(chǎn)品咨詢(xún)

                          留言框

                          • 產(chǎn)品:

                          • 您的單位:

                          • 您的姓名:

                          • 聯(lián)系電話(huà):

                          • 常用郵箱:

                          • 省份:

                          • 詳細地址:

                          • 補充說(shuō)明:

                          • 驗證碼:

                            請輸入計算結果(填寫(xiě)阿拉伯數字),如:三加四=7
                          上海達為科生物科技有限公司
                          • 聯(lián)系人:張
                          • 地址:上海市長(cháng)江南路180號長(cháng)江軟件園B區B637室
                          • 郵箱:2844970554@qq.com
                          • 傳真:
                          關(guān)注我們

                          歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息

                          掃一掃
                          關(guān)注我們
                          版權所有©2024上海達為科生物科技有限公司All Rights Reserved    備案號:滬ICP備15041491號-2    sitemap.xml    總流量:100939
                          管理登陸    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    
                          男女视频免费在线观看_波多野结衣中文字幕一区二区三区_亚洲精品无码久久毛片_国产偷亚洲偷欧美偷精品