咨詢(xún)熱線(xiàn)

                          18017847121

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                          細胞形態(tài)觀(guān)察服務(wù)

                          簡(jiǎn)要描述:細胞形態(tài)觀(guān)察服務(wù)是達為科生物的基礎服務(wù)項目之一,由細胞平臺經(jīng)驗豐富的實(shí)驗人員操作完成。

                          • 更新時(shí)間:2022-12-23
                          • 瀏覽次數:1736

                          詳細介紹

                          (一)倒置顯微鏡下直接觀(guān)察細胞形態(tài)

                          細胞形態(tài)變化包括:細胞核、細胞膜和細胞質(zhì)的改變,即細胞是否有空泡積累和脂質(zhì)小滴、是否可見(jiàn)細胞膜膨出(鼓泡)、細胞核染色質(zhì)的變化以及細胞器如線(xiàn)粒體、溶酶體等的變化、細胞脫壁和貼壁、細胞膜表面是否毛糙無(wú)光澤、細胞是否裂解為碎片等。通過(guò)細胞形態(tài)的這些變化,可直觀(guān)快速地判斷細胞毒性。

                          (二)透射電子顯微鏡觀(guān)察

                          【材料】

                          1. 2%~3%瓊脂糖。

                          2. 2%~2.5%戊二醛。

                          3. 1%四氧化*。

                          4. 0.2M PBS緩沖液。

                          5.梯度丙酮。分別為50%,70%,90%,100%濃度的丙酮。

                          【方法】

                          1.收集對數生長(cháng)期的培養細胞5x107左右。將細胞連同培養液放入2ml的離心管中,然后用PBS清洗2~3次,1000~1500r/min離心樣品5~10分鐘,吸去上清液,混勻細胞。

                          2.沿管壁小心加入2%~2.5%的冷戊二醛,輕輕吹打,使細胞混勻。在4℃的環(huán)境中固定30分鐘,然后用指彈法將細胞團塊彈散,繼續用新的固定液固定細胞30分鐘。1000r/min離心5分鐘,棄上清液。

                          3.在4℃下用PBS沖洗后放置1~2小時(shí)或者過(guò)夜,離心后棄上清液。

                          4.管內加入0.1~0.5m1 37℃的2%~4%的瓊脂糖液,混勻并冷卻,形成細胞瓊脂凝膠預包埋塊。

                          5.離心管中加入少量的PBS或者75%的乙醇,用鋁片沿管壁小心地將細胞瓊脂糖松動(dòng),預包埋塊移到含有75%乙醇的青霉素瓶中,一天后換固定液一次。4℃保存。

                          6.將預包埋塊切成1 mm3大小,放到1%四氧化*中4℃固定1~ 2小時(shí)。用PBS反復漂洗后放置30分鐘或過(guò)夜。

                          7.分別用50%,70%,90%,100%的丙酮脫水一次,每次10~15分鐘;然后100%丙酮脫水3次,每次30分鐘。

                          8.浸入稀釋包埋劑(丙酮:包埋劑=1:1)中,室溫1小時(shí)。再放到純包埋劑中,37℃過(guò)夜。然后60℃固定48小時(shí)。放置于干燥器中備用。

                          9.將樣品放到電子顯微鏡進(jìn)行透視觀(guān)察。

                          (三)掃描電子顯微鏡觀(guān)察

                          培養細胞電鏡掃描觀(guān)察非常方便;在觀(guān)察鐵壁細胞時(shí)也需要進(jìn)行消化,制備成細胞懸液后,用Hanks液漂洗1到2次后,除去細胞碎塊和血清蛋白,以防妨礙觀(guān)察。

                          【材料】

                          1. 1.5%戊二醛。

                          2. 0.2M PBS緩沖液。

                          3. 50%,70%,90%,95%,100%的梯度乙醇。

                          4. 1%四氧化*(Os04)。

                          5.丙酮。

                          【方法】

                          1.單層細胞蓋玻片培養物冷漂洗后,用1.5%戊二醛4℃固定1~2小時(shí)。PBS液清洗3次,每次10分鐘。

                          2.在4℃下用1 % OSO4固定1小時(shí),然后用PBS緩沖液清洗3次,每次10分鐘。

                          3.分別用50%,70%,90%,95%,100%的乙醇依次脫水,每個(gè)濃度的乙醇脫水2次,每次15分鐘。

                          4. 100%丙酮脫水3次,每次30分鐘。

                          5.將標本在4℃下用丙酮保存。

                          6.用掃描電子顯微鏡觀(guān)察。

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